DB12T 506-2014 大豆转基因成分筛查方法
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ID： |
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文件大小(MB)： |
0.37 |
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10 |
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日期： |
2016-8-16 |
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B 04,ICS 65.020.01,天津市地方标准,DB12,DB12/T 506—2014,大豆转基因成分筛查方法,Screening method for genetically modified soybean,2014-04-22 发布 2014-07-20 实施,天津市质量技术监督局发布,DB12/T 506—2014,I,前 言,本标准按照GB/T 1.1—2009 给出的规则起草,本标准由天津市质量技术监督局提出,本标准起草单位：天津市东丽区产品质量监督检验所、天津市农业质量标准与检测技术研究所,本标准主要起草人：黄凤军、陈杰、朱珠、李建、马强、赵新、龙起成、陈慧,本标准2014 年04 月首次发布,DB12/T 506—2014,1,大豆转基因成分筛查方法,1 范围,本标准规定了大豆中转基因成分定性PCR 筛查的术语和定义、检测方法、结果分析与表述,本标准适用于大豆及其制品中Lectin 内标准基因、CaMV35S 启动子、NOS 终止子、CP4-epsps 基,因、Bt 基因和bar/pat 基因的定性PCR 筛查检测,2 规范性引用文件,下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文,件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件,GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法,NY/T 672 转基因植物及其产品检测 通用要求,农业部2031 号公告—19—2013 转基因植物及其产品检测 抽样,农业部1485 号公告—4—2010 转基因植物及其产品成分检测 DNA 提取和纯化,3 术语和定义,下列术语和定义适用于本文件,3.1,Lectin 基因 Lectin gene,编码大豆凝集素的基因,3.2,CaMV 35S 启动子 35S promoter from cauliflower mosaic virus （CaMV）,来自花椰菜花叶病毒的35S 启动子,3.3,NOS 终止子 terminator of nopaline synthase （NOS） gene,来自胭脂碱合成酶基因NOS 的终止子,3.4,CP4-epsps 基因 5-enolpyruvylshikimate-3-phosphate synthase gene derived from Agrobacterium,sp. CP-4,来源于土壤农杆菌株系 （Agrobacterium sp.） CP4 株系一段可编码5-烯醇式丙酮莽草酸-3-磷酸,合酶的基因,3.5,Bt 基因 Bt（Bacillus thuringiensis）gene,来源与苏云金芽胞杆菌（Bacillus thuringiensis，简称Bt），可表达一种杀虫晶体蛋白的基因，常,见的Bt基因有cry1Ac基因、cry1Ab基因、cry1Ab/cry1Ac融合基因,3.6,bar/pat 基因 bialaphos resistance gene/phosphinothricin acetyltransferase gene,DB12/T 506—2014,2,bar 基因来源于土壤吸水链霉菌（Streptomyces hygroscopicus），pat 基因来源于绿产色链霉菌,（Streptomyces viridochromogens），均编码膦丝菌素乙酰转移酶（phosphinthricin acetyltransferase，PAT）,该酶具有对除草剂草丁膦（glufosinate）的耐受性。bar 基因和pat 基因具有较高的同源性,4 检测方法,4.1 试剂和材料,4.1.1 实验用水为重蒸馏水或符合GB/T 6682 规定的一级水,4.1.2 琼脂糖,4.1.3 10 g/L 溴化乙锭溶液：称取1.0 g 溴化乙锭（EB），溶于100 mL 水中，避光保存,注：溴化乙锭有致癌作用，配制和使用时应戴一次性手套操作并妥善处理废液,4.1.4 10 mol/L 氢氧化钠溶液：在160 mL 水中加入80.0 g 氢氧化钠（NaOH），溶解后再加水定容,到200 mL,4.1.5 500 mmol/L 乙二铵四乙酸二钠溶液（pH 8.0）：称取18.6 g 乙二铵四乙酸二钠（EDTA-Na2）,加入70 mL 水中，再加入适量氢氧化钠溶液（4.1.4），加热至完全溶解后，冷却至室温，用氢氧化钠,溶液（4.1.4）调pH 至8.0，加水定容至100 mL。在103.4 kPa（121 ℃）条件下灭菌20 min,4.1.6 1 mol/L 三羟甲基氨基甲烷-盐酸溶液（pH 8.0）：称取121.1 g 三羟甲基氨基甲烷（Tris）溶,解于800 mL 水中，用盐酸调pH 至8.0，加水定容至1 000 mL。在103.4 kPa（121 ℃）条件下灭菌20,min,4.1.7 TE 缓冲液（pH 8.0）：分别量取10 mL 三羟甲基氨基甲烷-盐酸溶液（4.1.6）和2 mL 乙二,铵四乙酸二钠溶液（4.1.5），加水定容至1 000 mL。在103.4 kPa（121 ℃）条件下灭菌20 min,4.1.8 50×TAE 缓冲液：称取242.2 g 三羟甲基氨基甲烷（Tris），先用300 mL 水加热搅拌溶解后,加100 mL 乙二铵四乙酸二钠溶液（4.1.5），用冰乙酸调pH 至8.0，然后加水定容到1 000 mL。使用,时用水稀释成1×TAE,4.1.9 加样缓冲液：称取250.0 mg 溴酚蓝，加10 mL 水，在室温下溶解1……
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